本文提出一種創新的集成生物傳感器系統,該系統基于混合硅塑料盤系統,可對乙型肝炎病毒(HBV)進行提取、純化和檢測。
通過整合磁珠固相提取法和 qRT-PCR 檢測,結合離心微流體和硅技術,實現核酸分析全自動化。
在芯片檢測區域集成了一個微型硅 qRT-PCR 芯片進行核酸擴增。
芯片采用透明 PMMA 作為材料,其直徑 130 mm,厚 2 mm。
qRT-PCR 硅芯片由1.7×1.3 cm(底部部分)與聚碳酸酯環(頂部)組裝在一起,其中包含六個反應腔,每個反應腔 25 μl。
硅芯片的底部集成了溫度傳感器和加熱器,達到 ±0.2°c 的溫度控制精度,加熱速率為 15°c/s,冷卻速率為 8°c/s,溫度分辨率為 0.1°c。
圖 2
頂部聚碳酸酯環是由注塑工藝制造。每個反應腔由不同直徑的圓柱體組成,頂部圓柱體為 3.8 mm(體積約為 9.6 ul),底部圓柱體為 3 mm(體積約為 14.1 ul)。
將兩部分(硅和聚碳酸酯環)對齊粘合以形成六個反應腔,每個反應腔的體積為 25 μl。
提取和純化時間約 15 min,qRT-PCR 檢測和數據分析時間約 60 min。
將約 5 μl 的提取液從洗脫腔轉移到硅腔,其中硅腔中包含擴增反應的所有引物和試劑和 6 μl 石蠟,以避免熱循環中樣品蒸發。
圖 4
片上流體旋轉協議如圖 4 所示。
審核編輯:劉清
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原文標題:集成磁珠法核酸提取的離心微流控芯片
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