721型分光光度計是分光光度法在可見光譜區范圍（360一800nm）內，進行定量分析常用的儀器之一。分光光度法以物質對光的選擇性吸收為根據，以朗伯-比爾定律（A＝ Kbc）為基礎來進行定量測定。

　　一、721型分光光度計的結構和工作原理

　　721型分光光度計由光源、單色器、吸收池和監測系統四大部分組成，全部裝成一體，其結構如附圖1.5（a）所示。

　　721型分光光度計的光學系統如附圖1.5（b）所示。

　　721型分光光度計采用自準式光路，單光束。利用12V25W鎢絲白熾燈泡作光源。由光源1發出連續輻射線，經聚光透鏡2和反射鏡7后，成為平行光束，經入射狹縫6及準直鏡4反射到單色光器（721型分光光度計的單色光器是棱鏡）3，經棱鏡色散后的光反射至準直鏡4，再經狹縫6，聚光透鏡9，變成平行的單色器照射到樣品池（比色皿）10，經樣品池吸收后透過的光照射到光電管13上，光電管受光進行光電轉換產生光電流，經放大器放大后輸送至檢流計，由表頭直接顯示出透光率（T%）或吸光度（A）。

　　準直鏡4裝在可旋轉的轉盤上，由波長調節器控制，轉動波長調節器時，利用阿基米得螺線凸輪可帶動準直鏡轉盤轉動，從而可在出射狹縫后面得到所需波長的單色光。通過調節出射狹縫6的寬度，就可獲得適合測量的光強。

　　二、721型分光度儀器安裝及使用前檢查

　　①儀器應安裝在干燥房間內，使用時應放置在堅固平穩的工作臺上。室內光線不宜太強，夏天不能用電風扇直吹儀器，以防燈泡燈絲發光不穩而影響測量。

　　②在未接上電源前，應對儀器的安全性進行檢查。電源線應牢固，通地要良好，各旋鈕的起始位置應正確。

　　③檢查放大器及單色器的兩個矽膠干燥筒，如受潮變色（干燥時為藍色，受潮后變紅色），應予更換（在儀器底部的干燥筒，可側豎儀器來檢查或更換）。

　　④儀器在未接通電源前，電表必須位于“0“刻線，否則要利用電表上的校正螺絲調至“0”處。

　　三、721型分光度儀器的操作方法

　　721型分光光度計外形如圖1.5（c）所示。

　　①先進行“使用前檢查”，一切正常后，打開比色池暗箱蓋7，接通電源6，預熱約20 min。

　　②調節波長選擇旋鈕（λ）2至所需波長，靈敏度調節鈕1放在“1”位置。調節“0“電位器3，校正電表8指針指0。

　　③將裝有參比溶液及待測溶液的比色皿按順序放入比色架上，使參比溶液處于光路位置，輕輕蓋上比色皿暗箱蓋，使光電管受光，調節“100%”電位器4至電表指針達滿刻度（T100％或A＝0）處。

　　④如果放大器靈敏度不合適（即③中不能調滿刻度），可重新調整靈敏度調節旋鈕（放大器靈敏度有三擋，是逐步增大的，“1”最低，其選擇原則是保證能使空白時調滿刻度，盡可能采用靈敏度較低擋，這樣儀器將有更高的穩定性），如果靈敏度不夠，可逐漸升高，但改變靈敏度后，必須按③重新校正“0”和“100%“。

　　⑤按③連續調整“0”和“100%“，直至穩定。至此調校完畢，即可進行測定工作。

　　⑥輕輕拉動比色皿架拉桿5，使待測液置于光路位置，即可讀取表頭指針所指的讀數（T%或A值）。

　　⑦測量完畢，打開比色皿暗箱蓋。

　　⑧實驗結束，關閉電源，將比色皿取出洗凈，用軟紙擦凈比色皿架及暗箱蓋，蓋上暗箱蓋，散熱后，罩好儀器罩。

　　四、分光度注意事項

　　①使用721型分光光度計時，連續光照光電管的時間不可太長，以避免光電管疲勞。不測定時，必須打開暗箱蓋，切斷光路，以延長光電管的使用壽命。

　　②根據需要選擇使用不同厚度的比色皿，同一厚度的一套比色皿應檢查使用。方法是使一套比色皿盛裝同一種有色溶液，測其透光率相對值，該值最大相差不應超過0.5%。

　　③拿取比色皿時，只能用手捏毛玻璃面，切不可用手捏透光面，以免污損而影響透光性能。比色皿外壁的水珠應用鏡頭紙或柔軟的吸水紙輕輕揩擦，不可用硬紙或用力擦拭。

　　④比色皿盛裝溶液時，以裝滿2/3為宜，不可過滿或太淺，以防拉動比色皿架時濺出或影響測定。對系列溶液的測量，應按從稀到濃的順序依次進行，以減小誤差。

　　⑤比色皿應用鹽酸-乙醇（（1:2）混合液或1:1HN03溶液浸泡，再用自來水，蒸餾水洗滌，不可用堿液、氧化性強的洗滌液（如鉻酸洗液）洗滌，以防腐蝕或造成粘接縫開裂。也不能用毛刷洗，以免損壞其透光面，更不能在爐子、火焰上或烘箱內加熱干燥。

　　⑥在分析工作中，根據有色溶液的濃度的大小選用合適規格的比色皿，以使溶液吸光度控制在0.2一0.8范圍內，以減小測量誤差。