資料介紹
細胞生物學家往往需要將外源分子送入細胞進行研究,比如質粒DNA或siRNA。化學試劑、電穿孔和病毒遞送系統是目前最常用的三種途徑。
遞送方法的選擇主要取決于目標細胞的類型,需要遞送的分子,以及研究所需的轉染效率。“人們用得最多的是最簡單的方法——化學轉染,”Mirus+Bio公司的Josh+Snow說。
化學轉染試劑旨在減少細胞對核酸的排斥(二者都帶負電荷),促使細胞膜通過胞吞、胞飲或融合攝入外源物質。對于容易培養和轉染的細胞系來說,傳統的化學和物理轉染(如電穿孔)就已經足夠了。不過化學試劑往往對細胞有毒,轉染原代細胞、干細胞或者其他難轉染細胞的效率也比較低。雖然病毒遞送對許多細胞類型的效率很高,但使用起來比較麻煩,還需要采取特殊的防護措施,對操作者的專業要求也比較高。
除此之外,人們還在探索全新的轉染方法。這篇文章,特別對激光轉染方式、轉染產品和方法進行了詳細的介紹。
GNOME(金納米顆粒介導的激光轉染)
Leibniz+University+Hannover%2C+Germany
GNOME轉染方案主要是通過短脈沖激光,在細胞膜上刺出微小的孔洞,使細胞外的分子能夠擴散進入細胞質。研究者們嘗試這一策略給細胞遞送分子已經有十多年了,但傳統方案的速度非常慢通量也很低。
Dag+Heinemann及其同事首先將細胞與直徑約200+nm的金納米顆粒共同孵育,讓它們慢慢沉積到細胞上。三個小時之后,研究者們用短脈沖的綠色激光束照射樣本。這一過程在研究者自制的自動化設備中進行,該設備帶有能夠移動培養皿的自動載物臺和軟件,以便快速照射樣本。
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